掌握蛋白质的分离纯化方法与原理。

一、根据分子大小不同的分离方法

1．透析法

2．超滤法

3．超速离心法

二、根据溶解度不同的分离方法

1．等电点沉淀法

2．盐析法

3．有机溶剂沉淀法

三、层析分离方法

1．凝胶过滤层析

2．离子交换纤维素层析

3．亲和层析

4．吸附层析

四、蛋白质的鉴定

蛋白质分离纯化过程中或分离后，常常要对蛋白质的含量、纯度、分子量、性质、等电点及末端氨基酸等进行鉴定与测定。

1．电泳法

电泳法，既可用于鉴定蛋白质的分子量，又可用于鉴定其纯度。

2．免疫法

免疫法是利用抗原-抗体特异结合原理对蛋白质进行定性鉴定分析的现代生物化学技术。将抗体（二抗）共价连接上荧光基团，来鉴定某种微量存在的抗原的免疫荧光标记。用酶标记抗体对电泳分离的蛋白质条带进行鉴定的免疫印迹等。

3．蛋白质的分子量测定

蛋白质分子量测定的方法很多，其中超速离心法、凝胶过滤法、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法是目前实验室常用的方法；此外，毛细管电泳法及质谱法是较新的方法。

4．蛋白质含量测定

在蛋白质的分离提纯过程中，经常要测定蛋白质的含量。最早的经典方法为凯氏定氮法，但此法是通过测定总有机氮，因此，测定值比实际蛋白含量高，而且操作繁琐，目前应用较少。

现在多用考马斯亮蓝法、Folin-酚试剂法、紫外吸收法、双缩脲法。

根据蛋白质分子的所带电荷、分子、蛋白质的变性及胶体性质等进行蛋白质的分离、提取、纯化及鉴定等。如蛋白酶制剂的生产及生物体某些功能蛋白研究中所应用的离子交换柱层析、凝胶过滤层析、聚丙烯酰胺凝胶电泳及医药卫生中的灭菌等。