流式细胞仪的基本操作及技巧
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流式细胞仪的基本操作及技巧
光电倍增管电压设定
流式细胞仪利用光电倍增管(PMT)将各通道检测到的荧光信号转变为电子信号进行分析,并且在转变信号时按照一定的比例关系提高电子信号的强度。
流式分析时每一个使用到的流式通道都必须设定其合适的电压,才能保证流式分析时得到正确的结果。
各通道电压的设定一般是在上样分析第一管时设定的,通常是阴性对照或者同型对照管一旦设定了对照管的电压,后面各实验组上样时就不能再改变电压的值,否则会因为电压不一致导致各实验组之间没有可比性。
各通道电压的调节
FSC信号,其设定原则时使样品细胞或者目标细胞位于流式图的中央或者靠近中央的位置。
SSC信号主要是考虑样品细胞或者目标细胞的颗粒度大小,SSC电压使样品细胞或者目标细胞位于流式图的中央或者靠近中央的位置。
调节荧光通道设置电压的基本原则使将自发荧光控制在数轴的1/4范围内,即荧光信号在1/4内的细胞都是阴性细胞,荧光信号超过1/4的细胞为阳性细胞。