《病原生物学与免疫学实验》B

陈辉、朱俊萍、顾园等

目录

  • 1 实验室安全
    • 1.1 病原生物学实验室安全
    • 1.2 病原生物学实验室基本安全操作及意外事故紧急处理办法
  • 2 基础实验
    • 2.1 显微镜使用方法
    • 2.2 细菌的形态学观察
    • 2.3 细菌的分离、接种和培养
    • 2.4 真菌的形态和培养性状观察
    • 2.5 细菌耐药性检测
    • 2.6 环境、物体及人体体表的微生物培养及消毒灭菌
  • 3 综合实验
    • 3.1 呼吸系统感染常见病原的实验室检查
      • 3.1.1 咽部细菌的分离培养及形态学观察
      • 3.1.2 模拟结核分枝杆菌感染标本的形态学鉴定
      • 3.1.3 卫氏并殖吸虫的形态学观察
    • 3.2 消化系统(肠道)感染常见病原生物的实验室检查
      • 3.2.1 设计性实验 模拟肠道感染标本的细菌分离培养与鉴定
      • 3.2.2 似蚓蛔线虫的形态学观察与实验操作
      • 3.2.3 钩虫的形态学观察与实验操作
      • 3.2.4 其他肠道寄生蠕虫的形态学观察
      • 3.2.5 其他肠道寄生原虫的形态学观察
    • 3.3 消化系统(肝胆)感染常见病原生物的实验室检查
      • 3.3.1 设计性实验 根据肝炎病例设计实验室诊断方法
      • 3.3.2 日本血吸虫的形态学观察与实验操作
      • 3.3.3 其他肝胆寄生虫的形态学观察与实验操作
    • 3.4 血液或组织内感染常见病原生物的实验室检查
      • 3.4.1 虚实之间 探究艾滋——以临床案例为导向的艾滋病诊疗虚拟仿真实验项目
      • 3.4.2 疟原虫的形态学观察与实验操作
      • 3.4.3 其他血液或组织寄生虫的形态学观察
    • 3.5 皮肤肌肉组织感染常见病原生物的实验室检查
      • 3.5.1 炭疽芽胞杆菌和厌氧芽胞杆菌的形态学观察
      • 3.5.2 皮肤肌肉组织感染常见寄生虫的形态学观察
    • 3.6 泌尿生殖系统感染常见病原生物的实验室检查
      • 3.6.1 泌尿生殖系统感染常见病原生物的形态学观察
  • 4 拓展实验
    • 4.1 小鼠感染病原生物后细胞免疫现象观察
    • 4.2 小鼠抗体形成细胞的检测
消化系统(肝胆)感染常见病原生物的实验室检查

【导言】

    肝脏感染性疾病的病因包括病毒、细菌、寄生虫及真菌。其中,病毒性肝炎最常见,病原主要包括甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒和戊型肝炎病毒,此外,黄热病毒、巨细胞病毒、EB病毒及风疹病毒等也可引起肝炎。金黄色葡萄球菌、链球菌、铜绿假单胞菌及厌氧菌等病原菌可引起细菌性肝脓肿。胆囊感染常见病原菌以革兰阴性菌为主,其中,大肠埃希菌最为常见,其它的病原菌包括肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌等,且经常合并厌氧菌感染。此外,华支睾吸虫、日本血吸虫、细粒棘球绦虫、溶组织内阿米巴等寄生虫也可寄生于消化系统(肝胆),蛔虫成虫的钻孔习性可导致其钻入人体胆道或胰管引起感染。

    病毒性肝炎的实验室特异性检查主要采用免疫学方法,如化学发光免疫分析试验或ELISA等检测病毒抗原及抗体等血清学特异性标志物;病毒学检测采用基于PCR扩增的方法进行病毒核酸的定量定性检测,主要用于现症感染的确认、抗病毒治疗前基线病毒载量分析,以及治疗结束后的应答评估。其中,HBV‑DNA定量检测主要用于评估HBV感染者病毒复制水平,对于诊断、启动治疗以及评估患者对抗病毒治疗的应答情况是必要的。近年,对抗病毒治疗的乙肝患者血液样本实施前基因组RNA的定量测定,为预测核苷类似物治疗停药、功能性治愈提供了新的病原学标志。

    疑似病原菌感染者,取肝脓液、血样或胆汁,进行细菌培养,检查需氧菌及厌氧菌,必要时行真菌检查。

    疑似寄生虫感染者,要综合流行病学资料、免疫学检测、影像学检查以及可能的病原学检查结果进行综合诊断,其中病原学检査结果是确诊的依据。从粪便中检出华支睾吸虫虫卵,或进行胆汁引流时发现成虫即可确诊肝吸虫感染。日本血吸虫感染可通过从患者粪便中检获虫卵、环卵沉淀试验检测抗体、影像学检查以及PCR检测血吸虫特异性DNA片段进行诊断。对疑似肝包虫病者,可借助影像学及免疫学检查辅助诊断,并通过手术取出棘球蚴进行病原学确诊。阿米巴肝脓肿及胆道蛔虫症患者可通过影像学检查辅助诊断。


【病例摘要】

  • 病例1

    男童患儿,5岁,因反复全身浮肿3个月,发现肝功异常1个月入院。

    患儿于3月前无明显诱因出现双上眼睑及双下肢浮肿,逐渐遍及全身。2月前全身浮肿加重,于当地医院查尿常规中蛋白(++++)、红细胞 6~7个/HP(每高倍视野)、白细胞 6~7个/HP。口服激素治疗(具体剂量不详)4天全身浮肿明显减轻。此后患儿因尿蛋白持续异常于1个月前到当地儿童医院住院治疗。谷丙转氨酶48 U/L(0~40 U/L),HBsAg阳性,诊断为慢性乙型病毒性肝炎、乙型肝炎病毒相关性肾炎,经治疗肝功恢复正常,但尿蛋白仍无明显好转而转入本院治疗。

    入院查体:肝右肋下2.0 cm;脾肋下未及。双下肢中度凹陷性浮肿,阴囊轻度水肿。

    实验室检查:①白蛋白29 g/L;②甘油三酯 3.28 mmol/L;③HBsAg(+);④肝组织病理见肝细胞肿胀、气球样变,小叶内散在点灶状坏死,汇管区较多炎细胞浸润伴碎片样坏死,诊断慢性病毒性肝炎;⑤肾组织病理学诊断为膜性肾病,免疫荧光学检查HBsAg(+)。

  • 病例2

    男性患者,33岁,广东中山市人。因“突发上腹剧痛3小时”入院。

    入院查体:体温36℃,皮肤、巩膜无黄染。剑突下压痛明显,Murphy’s 征阳性,肝区叩击痛阳性。

    实验室检查:①血常规:白细胞 12.9×109/L,中性粒细胞72.9%,嗜酸性粒细胞12%,嗜酸性粒细胞绝对值1.54×109/L;②肝脏转氨酶:谷丙转氨酶242U/L,谷草转氨酶1137 U/L;③腹部超声:胆囊增大9.9 cm×4.2 cm,张力增高,内见1.6 cm×1.2 cm强回声团;④腹部CT平扫示胆囊炎、胆囊结石、胆总管及肝内胆管扩张。

    入院后给予患者抗感染、解痉等治疗,腹痛未缓解,遂急诊行剖腹探查术。术中见胆囊肿胀,呈急性炎症病变,胆总管扩张,直径约10 mm。切除胆囊后见深褐色黏稠胆汁,并见数条黑色细小条状物,长10~20 mm,形似“葵花子”,考虑胆道寄生虫感染。打开胆总管探查,吸出深褐色黏稠胆汁伴细小黑色条状物。探查胆总管下段通畅,冲洗胆道后置T型管引流。将细小条状物送镜检,考虑肝吸虫成虫。术后将T型管引流的胆汁低速离心后镜检,见肝吸虫虫卵。术后第1~10天,T型管内间断引出数条肝吸虫成虫。

  • 病例3

    女性患者,32岁。因“感觉乏力纳差厌油2周”入院。

    患者近2月来逐渐出现乏力、食欲下降及厌油腻,伴有上腹部饱胀感,腹部隐痛,未见发热、咳嗽咳痰及腹痛腹泻。

    查体见:肝脏右肋下3 cm,质软,边缘略硬,肝区叩痛(+)。

    既往史:四个月前给病人抽血时曾不慎被针头刺伤。

    临床初步判断可能为肝炎。

  • 病例4

    患者男,13岁,安徽怀宁县人。因“发热、腹痛伴肝脏占位病变2月”入院。

    患者自两月前每天下午发热,体温最高38.4℃,无明显畏寒及寒战,伴有腹痛、皮疹,连续3日未经治疗后好转。患者在入院前于当地医院CT示肝区多发占位。

    入院查体:肝区右肋下50px,轻微压痛,叩痛阴性,肝颈返流征阴性。

    实验室检查:①血常规:白细胞12.9×109/L,中性粒细胞46%,淋巴细胞20%,嗜酸性粒细胞32%,单核细胞2%,红细胞3.33×1012/L,血红蛋白92 g/L,血小板334×109/L;②结肠镜下见一桔黄小点,取该处经压片镜检可见肠粘膜血管内虫卵呈串珠状。显微镜下观察虫卵形态为:黄色,椭圆形,内含一毛蚴,虫卵侧方有一棘,为日本血吸虫卵;③环卵沉淀试验阳性;④血清血吸虫抗原阳性。

【病例讨论】

  1. 总结可引起肝脏感染的病原生物种类。如何通过实验室检查区别这些病原生物?

  2. HBV感染可采取哪些实验方法进行诊断?

  3. HBV相关性肾炎与Ⅲ型超敏反应有何关系?可通过何种试验证实?

  4. 如果是成年慢性乙型肝炎患者,应该定期复查哪些指标?

  5. HBV感染后可引起患者哪些免疫功能发生改变?

  6. 日本血吸虫虫卵除沉积于肠壁外,还可在宿主哪些组织和样本中出现?

  7. 日本血吸虫病除病原学诊断外,还可通过哪些方法辅助诊断?

  8. 哪些饮食习惯会导致肝吸虫病的发生?如何预防肝吸虫病?

  9. 棘球蚴常见寄生部位有哪些?