DNA化学合成 DNA  chemosynthesis

化学合成目的基因包括4个基本步骤：目的基因设计、寡核苷酸片段的合成、分离和纯化、组装成目的基因。其制备包括4个过程：（1）根据已知的核苷酸序列，将核苷酸单体由3′，5′-磷酸二酯键连接，先合成一定长度、特定序列结构、两个单链（上下各重叠6~10bp）的寡聚核苷酸片段；（2）在核苷酸片段的5′端分别加上磷酸集团，退火拼接；（3）用DNA连接酶连接，使它们按照一定的顺序共价结合，形成完整的基因序列；（4）通过载体克隆，获得克隆化的化学合成基因。

目前化学合成基因受到两种因素限制：（1）化学合成家聚核苷酸片段长度有限，经基因片段组装（连接）才能合成较大片段的目的基因，使合成难度增大；（2）化学合成目的基因的加个比较昂贵。

化学合成法的应用

化学合成寡核苷酸是基因克隆与修饰的重要手段，主要应用于以下4个方面：（1）合成用于PCR扩增反应的引物；（2）合成用于文库筛选的分子探针；（3）合成用于基因核苷酸序列分析的引物；（4）用于基因定点突变研究等。