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1 理论教学
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2 实践演练

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了解RNA的结构与类别;掌握参与蛋白合成的RNA结构特征及其功能,熟悉具有其他功能的RNA;明确DNA与RNA的结构差异。
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一、RNA一级结构和类别
核苷酸间以3′,5′磷酸二酯键方式连接起来多聚核酸链,其碱基序列不同,书写方向:5′→3′;RNA一级结构表示法有结构式、线条式、字母式,通常以字母式表示。
参与蛋白合成的RNA主要有:
(1)mRNA——信使RNA(messenger RNA),是蛋白质合成的模板(种类最多)。
(2)rRNA——核糖体RNA(ribosoal RNA),与蛋白质结合构成核糖体,是蛋白质合成的场所(含量最多)。
(3)tRNA——转移RNA(transfor RNA),携带活化氨基酸(分子量最小)。
二、tRNA的分子结构
1.tRNA的一级结构
核苷酸间以3′,5′磷酸二酯键方式连接起来多聚核酸长链。
2.tRNA的二级结构
tRNA的螺旋程度较高,某些局部单链区域形成螺旋,使得tRNA的二级结构呈三叶草形。tRNA的三叶草形结构特征为:
(1)分子较小:25ku, 74-93 核苷酸,沉降系数4S。
(2)具较多的稀有碱基。
(3)3′-末端均为CpCpA-OH。
(4)5′-端为pG,也有pC。
(5)tRNA的二级结构中具有四个臂四个环: 氨基酸臂,DHU嘧啶环(臂)、反密码环(臂)、额外环、TψC环(臂)。
3.tRNA的三级结构
tRNA的三级结构为倒 L 形。tRNA的生物功能是搬运活化氨基酸到核糖体,参与蛋白质的合成。
三、rRNA的分子结构
1.rRNA结构特征
rRNA是由大约120~5000个核苷酸组成的单链,rRNA的螺旋化程度较tRNA低,但也是通过单链自身折叠形成的茎环结构,分子越大茎环结构越复杂。rRNA与蛋白质组成核糖体后方能发挥其功能。
由于rRNA分子柔性较大,三级结构的研究较困难,目前对rRNA的三级结构还了解不多。
2.rRNA的种类
rRNA的种类、大小一般用沉降系数(S)表示。根据沉降系数大小不同,组成核糖体的rRNA种类与大小不同:
(1)真核生物:5S rRNA、28S rRNA、5.8S rRNA、18S rRNA。
(2)原核生物:5S rRNA、23S rRNA、16S rRNA。
大肠杆菌核糖体中的5SrRNA含120个核苷酸、16SrRNA含1 542个核苷酸、23SrRNA含2 904个核苷酸。
四、mRNA的分子结构
mRNA是蛋白质合成的模板,每一种多肽都有一种特定的mRNA负责编码,因此,细胞内mRNA的种类很多,且分子大小不一。原核生物的mRNA是多顺反子,真核生物的mRNA是单顺反子。顺反子是决定一条多肽链的完整的遗传功能单位。
1.原核细胞mRNA的结构特点
典型的原核生物mRNA是由多顺反子转录来的,可编码几条不同的多肽链,如大肠杆菌的乳糖操纵子中三个结构基因转录成一条多顺反子mRNA。多顺反子mRNA的5'端和3'端都有非编码区,编码区之间也有非编码的间隔区,间隔区长短不一;每个编码区都有自己的起始密码子和终止密码子。
2.真核细胞mRNA的结构特点
真核生物mRNA是单顺反子,只编码一条多肽链,其5′端和3′端各有一段非编码区。真核细胞mRNA的5′-末端鸟嘌呤N7被甲基化,形成特殊的5′-m7G-5′ppp5′-Nm-3′-P结构,又称5′-帽子(cap)。鸟嘌呤核苷酸通过经焦磷酸与相邻的核苷酸以5′,5′-磷酸二酯键相连。5′-帽子功能是:
(1)封闭mRNA的5′端,使其没有游离的5′-磷酸,防止5′-核酸外切酶降解作用,使mRNA更稳定。
(2)作为mRNA与核糖体结合的信号,无帽子结构的mRNA不能与核糖体的40S亚基结合。
(3)与蛋白质合成的正确起始作用有关,帽子结构附近区域能形成发荚结构,缩短了帽子结构与起始密码子之间的空间距离,因此,推测帽子结构可能是蛋白质合成的起始辨认信号的一部分。某些真核细胞病毒也有5′-帽子结构。
真核细胞mRNA在3′-末端还有一段长约200个核苷酸的polyA(polyadenylic acid),是在转录后经polyA聚合酶作用而添加上去的。原核生物mRNA一般无3′-polyA。polyA的功能:与mRNA从细胞核到细胞质的转移有关;与mRNA的半寿期有关,新合成的mRNA,polyA链较长,而衰老的mRNA,polyA链缩短。
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mRNA与cDNA
真核细胞mRNA在3′-末端的polyA结构,可以和体外合成的oligo-dT互补,因此基因的分子操作中,常用来进行互补与mRNA的cDNA的合成,进而可以构建cDNA文库;或进行基因表达的时空性及基因表达调控等研究。
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